點(diǎn)擊圖片查看原圖
|
|
蛋白相互作用是指兩個(gè)及以上的蛋白質(zhì)分子結(jié)合形成蛋白質(zhì)復(fù)合體的一個(gè)過(guò)程。一般情況下蛋白質(zhì)很難單獨(dú)發(fā)揮作用,都是由多個(gè)蛋白質(zhì)分子的相互協(xié)調(diào)共同實(shí)現(xiàn)復(fù)雜的細(xì)胞功能。因此專注于蛋白相互作用的研究更加利于探索疾病的發(fā)生發(fā)展、找尋特定的疾病預(yù)測(cè)治療方法,并且在新藥研發(fā)的研究方面提供新的思路。蛋白質(zhì)互作分析的方法較多,百泰派克提供蛋白質(zhì)互作分析服務(wù),及后續(xù)基于液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)(LC-MS/MS)對(duì)IP、Co-IP樣品及GST融合蛋白Pull-down等純化樣本中的蛋白/蛋白混合物的質(zhì)譜鑒定分析服務(wù)。詳情參見(jiàn):
蛋白質(zhì)相互作用質(zhì)譜分析
免疫共沉淀法(CO-IP)結(jié)合質(zhì)譜聯(lián)用的蛋白互作分析
GST融合蛋白Pull-down技術(shù)結(jié)合質(zhì)譜聯(lián)用的蛋白互作分析
SILAC與免疫共沉淀結(jié)合質(zhì)譜聯(lián)用的蛋白互作分析
免疫共沉淀法(CO-IP)利用抗原抗體之間的特異性來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)之間的生理性相互作用的一種方式。*先在實(shí)驗(yàn)中為了*大限度的保留細(xì)胞中蛋白的相互作用,會(huì)使用非離子變性劑來(lái)裂解細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞裂解時(shí),細(xì)胞內(nèi)的蛋白相互作用被保存下來(lái),在其中加入相應(yīng)的抗體,使抗體與細(xì)胞中的特異蛋白質(zhì)結(jié)合,再加入蛋白A/G形成抗體蛋白復(fù)合物,進(jìn)行離心、分離,使抗體蛋白復(fù)合物沉淀,棄去上清液,*后用質(zhì)譜技術(shù)鑒定沉淀下來(lái)的蛋白質(zhì),進(jìn)而證明兩者間的相互作用。僅適用于分析穩(wěn)定或者強(qiáng)烈的蛋白質(zhì)間相互作用;通常用來(lái)鑒定某個(gè)目標(biāo)蛋白質(zhì)與另一個(gè)蛋白質(zhì)之間相互作用或者被用來(lái)尋找與某個(gè)目標(biāo)蛋白質(zhì)存在相互作用的未知蛋白質(zhì)。
百泰派克生物科技針對(duì)樣品蛋白的提取,表達(dá)和純化的優(yōu)化方案可確保獲得高質(zhì)量的誘餌和獵物蛋白,為客戶提供優(yōu)質(zhì)的Co-IP蛋白互作分析服務(wù)及對(duì)免疫共沉淀CO-IP獲取的蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)譜分析。
• 優(yōu)點(diǎn):可分離得到天然狀態(tài)下相互作用的蛋白復(fù)合物;
• 缺點(diǎn):靈敏度較低;不能進(jìn)行親和力低和瞬間的蛋白質(zhì)相互作用分析檢測(cè)。
GST融合蛋白pull-down沉降技術(shù),利用基因重組將帶有GST標(biāo)簽的載體插入到目標(biāo)蛋白A上,谷胱甘肽包裹的磁珠與目標(biāo)融合蛋白結(jié)合,加入細(xì)胞裂解液后,具有相互作用的蛋白被融合蛋白吸附,加入過(guò)量的谷胱甘肽進(jìn)行洗脫,*后用MS技術(shù)分析。這種方法主要是研究體外強(qiáng)烈或者穩(wěn)定的蛋白質(zhì)間相互作用;可以鑒定兩種已知的感興趣蛋白質(zhì)可能存在的直接相互作用;尋找可能與目標(biāo)蛋白存在相互作用關(guān)系的未知蛋白。
作為技術(shù)依托型的科研技術(shù)服務(wù)公司,百泰派克生物科技在蛋白互作分析服務(wù)及基于質(zhì)譜的互作蛋白質(zhì)質(zhì)譜鑒定分析方面擁有多年經(jīng)驗(yàn)。百泰派克提供基于GST pull-down蛋白互作分析服務(wù),及Pull-down靶蛋白質(zhì)譜鑒定服務(wù)。我們以嚴(yán)格的質(zhì)量控制和較短的檢測(cè)周期為特色,百泰派克向客戶提供可定制的一站式服務(wù),涵蓋您項(xiàng)目中從基因合成到數(shù)據(jù)報(bào)告的每個(gè)步驟。
• 優(yōu)點(diǎn):可排除細(xì)胞內(nèi)其他情況的干擾;可以直接檢測(cè)蛋白質(zhì)之間是否有相互作用;方法簡(jiǎn)單,操作方便。
• 缺點(diǎn):在細(xì)胞外進(jìn)行,不能準(zhǔn)確的反應(yīng)細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)相互作用關(guān)系。
利用SILAC方法分別標(biāo)記實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組細(xì)胞后進(jìn)行Co-IP實(shí)驗(yàn),依靠抗原與抗體之間的專一性反應(yīng)分離得到免疫復(fù)合物;再通過(guò)LC-MS/MS來(lái)定性/定量檢測(cè)免疫復(fù)合物中的蛋白;當(dāng)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組中某個(gè)蛋白質(zhì)的含量達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)差異時(shí),判定這個(gè)蛋白質(zhì)與研究的蛋白具有相互作用,可極大降低蛋白質(zhì)互作假陽(yáng)性結(jié)果可能性。SILAC技術(shù)和Co-IP-MS技術(shù)結(jié)合可用于高通量定量分析在特定情況下蛋白的互作蛋白網(wǎng)。
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質(zhì)譜平臺(tái),Orbitrap Fusion質(zhì)譜平臺(tái),Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC,提供SILAC與免疫共沉淀質(zhì)譜聯(lián)用的蛋白互作分析服務(wù)技術(shù)包裹(SILAC-based CoIP-MS),您只需要將您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康母嬖V我們并將您的細(xì)胞寄給我們,我們會(huì)負(fù)責(zé)項(xiàng)目后續(xù)所有事宜,包括細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞標(biāo)記、蛋白提取、抗體IP、效率檢測(cè)、蛋白酶切、肽段分離、質(zhì)譜分析、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)分析、生物信息學(xué)分析。
關(guān)于我們 | 聯(lián)系方式 | 使用協(xié)議 | 版權(quán)隱私 | 網(wǎng)站地圖 | 排名推廣 | 廣告服務(wù) | 積分換禮 | 網(wǎng)站留言 | RSS訂閱 |違規(guī)舉報(bào) |
Copyrirht ? 2008-2021 康澤醫(yī)械網(wǎng) Kangze Medical (Hubei) Technology Co., Ltd. All Rights Reserved |
|||
工信部ICP備案:鄂ICP備18020429號(hào)-1 公安備案:42018502002952號(hào) 互聯(lián)網(wǎng)藥品信息服務(wù)資格證:(鄂)-非經(jīng)營(yíng)性-2018-0063 |